胰腺癌免疫治疗新靶点RIPK2

        胰腺癌（PDAC）由于对临床中广泛使用的化疗药物及免疫检查点阻断（ICB）治疗反应性差，目前仍是最致命的恶性肿瘤之一，因此迫切需要寻找更为有效的治疗靶点。PDAC抗原性较低，缺乏免疫激活“潜能”是导致其免疫逃逸的原因之一。因此提高可以被识别的免疫原性靶点并改善MHC-I对抗原的递呈能力，对于提高免疫检查点抑制治疗的疗效至关重要。虽然癌症可以通过多种不同的方式损害MHC-I抗原提呈途径，但是癌症的某些抗原提呈缺陷可能是可逆的。因此阐明导致MHC-I抗原提呈缺陷的机制，明确可行的治疗靶点以逆转这种缺失，对改善基于T细胞的免疫治疗效果是十分有必要的。

        2023年10月12日，浙江大学基础医学院刘云华团队、浙江大学附属第二医院王达团队、浙江大学附属妇产科医院钱俊斌团队及四川大学华西医院姜红团队在Cancer Discovery发表了题为 Receptor-interacting protein kinase 2 as an immunotherapy target in pancreatic cancer的研究论文。该团队应用CRISPR/Cas9技术在胰腺癌荷瘤模型中筛选发现，受体蛋白相互作用激酶2（RIPK2）是胰腺癌中参与免疫逃逸的关键基因。RIPK2参与调节MHC-I经自噬溶酶体途径降解。在动物模型中，RIPK2的基因敲除显著提高了ICB治疗胰腺癌的治疗效果。RIPK2有望成为评估胰腺癌预后和增强免疫治疗疗效的新靶点。同时，关于RIPK2改善成纤维细胞增殖的发现，从另一角度为开发RIPK2抑制剂作为潜在胰腺癌治疗策略提供了理论支持。

        该研究团队首先在免疫正常及缺陷小鼠胰腺原位成瘤模型中进行了体内功能性CRISPR/Cas9 筛选。对筛选结果分析发现，与裸鼠相比在免疫正常小鼠的肿瘤中RIPK2基因是排名靠前的耗竭基因，提示RIPK2可能通过影响免疫微环境参与胰腺癌进展。然而，大多数关于RIPK2的研究都集中在其作为识别细菌的NOD1/2胞内受体的信号转导蛋白上，但RIPK2在调节肿瘤微环境中的功能尚不清楚，这引起了研究人员的兴趣。

RIPK2功能研究

        为了研究RIPK2在胰腺癌免疫逃逸中的作用，研究人员在多种小鼠胰腺癌细胞中对RIPK2进行敲低。结果表明，在免疫缺陷小鼠及体外培养时，抑制RIPK2并不影响肿瘤生长。然而，在免疫正常小鼠中，抑制RIPK2显示出了明显生长受限的状态，并且小鼠的存活周期显著延长。这表明RIPK2在促进胰腺癌免疫逃逸过程中起着非常重要的作用。为进一步验证RIPK2如何影响免疫微环境，研究人员通过免疫组化及流式分析，发现RIPK2缺陷肿瘤中CD8+ T细胞浸润明显增多，对肿瘤的杀伤能力也明显增强。同时，研究人员还利用单细胞测序来进一步证实RIPK2对胰腺癌肿瘤微环境中免疫格局的影响。这些结果表明，RIPK2通过影响CD8+ T细胞浸润促进胰腺癌免疫逃逸。

       为研究肿瘤RIPK2表达如何影响CD8+ T细胞浸润，研究人员通过对比研究发现与RIPK2正常表达的肿瘤细胞相比，RIPK2缺陷肿瘤细胞膜表面MHC-I表达明显升高。MHC-I是肿瘤抗原提呈的关键分子，对于机体发挥免疫监视和免疫清除能力至关重要。研究人员分别用蛋白合成抑制剂CHX或溶酶体降解途径抑制剂巴佛洛霉素（BafA1）处理携带shNT和shRIPK2的胰腺癌细胞，发现RIPK2缺失增加了MHC-I蛋白稳定性，减少了MHC-I经溶酶体降解。基于RIPK2对膜定位MHC-I水平的影响，团队人员假设RIPK2通过影响MHC-I自噬溶酶体降解途径影响免疫逃逸。为了检验这一假设，团队成员利用质谱及免疫沉淀实验等，证实了RIPK2与NBR1及MHC-I间的相互作用。在胰腺癌细胞中，NBR1是介导MHC-I经自噬溶酶体途径降解的关键因子。团队成员在RIPK2缺陷细胞中过表达不同类型RIPK2突变体进行的一系列体内外实验证实，RIPK2是通过泛素化影响NBR1介导的MHC-I经自噬酶体降解途径来影响肿瘤抗原提呈，从而影响CD8+ T细胞浸润的。

胰腺癌小鼠成瘤模型

       最后，研究人员利用小鼠成瘤模型，通过药理学抑制或遗传学靶向RIPK2评估RIPK2抑制对ICB治疗的影响。通过多种小鼠胰腺癌成瘤模型观察到，抑制RIPK2表达或抑制其泛素化能显著延长胰腺癌对ICB治疗的反应性，并显著延长小鼠的存活时间。免疫分析表明，使用RIPK2抑制剂联合ICB治疗能显著增加肿瘤内CD8+ T细胞浸润及功能激活，减少耗竭T细胞数量。这表明靶向抑制肿瘤细胞RIPK2能够通过减少MHC-I自噬溶酶体降解改善抗原提呈能力，增加CD8+ T细胞浸润及功能，从而提高了ICB的治疗效果。

       本研究为肿瘤免疫治疗提供了一个新策略，通过靶向RIPK2来增加肿瘤抗原提呈能力促进胰腺癌中CD8+ T细胞向肿瘤内浸润从而增强免疫治疗效果。这一发现对提高免疫治疗疗效，特别是在免疫治疗抵抗性胰腺癌中，具有重要的临床意义。

原文链接：https://doi.org/10.1158/2159-8290.CD-23-0584